了解給定細胞群的數量和特征對于許多細胞/分子生物學研究至關重要。許多領域，如免疫學，在很大程度上依賴于量化群體中細胞數量以及這些細胞所具有的各種特征的能力。

血細胞計數器：一種傳統的細胞計數方法

多年來，已經開發出許多技術，使科學家能夠提出和回答這些問題。一種非常古老的技術是血細胞計數器，它允許科學家手動計數指定體積的細胞。簡單地說，血細胞計數器上的不同網格和正方形由精確的表面積定義。表面積乘以網格上方蓋玻片的高度，可提供精心指定的體積。

血細胞計數器的不精確性是由一些更現代的技術改進的因素引起的。例如，依靠人類對網格上微小物體的解釋會引入用戶之間的差異，這會根據多年的經驗進一步分層。載玻片的不加工意味著腔室高度很少是真正的 100 μm，這會給方程增加假設，從而導致與真實計數的總體偏差。

細胞計數的現代解決方案

自動細胞計數儀

像 CellDrop 這樣的自動細胞計數儀通過利用算法每次以相同的方式計數來克服這些挑戰。CellDrop 的DirectPipette™ 技術還利用高精度電機將 100 μm 的精確腔室高度設置為 100 μm，每次都好的。自動細胞計數儀還受益于快速圖像采集，消除用戶偏差并顯著提高實驗的一致性。

流式細胞儀

流式細胞術細胞計數的另一種現代解決方案是流式細胞儀。流式細胞儀通過毛細管吸入細胞，然后將每個細胞以單條文件線通過一系列激光器，從而快速分析大量單個細胞。這些激光器除了檢測前向散射（細胞直徑）和側向散射（細胞密度或體積）外，還可以檢測與細胞表面結合的熒光團。

流式細胞術可實現高通量分析，快速表征數千至數百萬個細胞，促進高效的數據采集。通常，分析設置為運行到達到指定數量的細胞，例如，100 萬個細胞。靶向表面蛋白的熒光抗體使研究人員能夠闡明不同亞群中細胞的百分比，從而識別所分析的總樣品中的各種細胞類型。

流式細胞儀在細胞計數中的局限性

與任何技術一樣，流式細胞儀也有局限性。雖然流式細胞儀在了解內部檢測器經過的事件數量方面表現出色，但了解包含這些事件的精確進氣量卻不太容易測量。對于某些流式細胞儀，內部流體泵可以每年校準一次，以確保進氣量足夠精確，從而得出準確的細胞計數。通常，泵不容易校準或根本沒有校準，這可能導致細胞/mL 定量不準確。此外，傳統的流式細胞儀通常缺乏提供空間信息或詳細單細胞圖像的能力。

補充技術：流式細胞術和成像

為了克服這些限制，專家們經常用成像流式細胞術來補充流式細胞術。成像流式細胞儀將高分辨率圖像捕獲與傳統流式細胞術原理相結合，可進行詳細的流式細胞術圖像分析。這提供了有價值的空間信息和細胞群熒光強度的量化，顯著增強了細胞分析能力。成像流式細胞術還可以清楚地區分紅細胞和有核細胞，這對于準確的細胞計數至關重要。

許多流式細胞術專家使用的另一種實用解決方案是在流式細胞儀上進行測量之前，使用另一種方法（例如自動細胞計數儀）對細胞進行計數。這結合了兩種技術的優勢，提供了精確的量化和詳細的表征。

對具有 AO/PI 等熒光活力染色劑的細胞進行計數可產生清晰的熒光圖像，從而直觀地確認細胞活力狀態。有關 AO/PI 染色如何為活力評估提供可靠樣本圖像的更多詳細信息，請閱讀此技術文檔。當隨后通過流式細胞儀分析相同的細胞群時，屬于每個亞群的細胞百分比變得清晰。該數據可以與活細胞濃度相結合，以確定所分析的每個類別中的細胞數量。

總結

每個工具都有其擅長的特定用途。雖然許多工具可以用來完成它們不是為之設計的任務，但它們通常無法像專門為這項工作構建的工具那樣出色。

這一原則適用于生物學中不同的細胞分析方法。沒有一種工具在所有方面都好。相反，每項技術都與其他技術相輔相成，在特定領域表現出色并提供最佳數據。

通過結合基于圖像的細胞計數和流式細胞術等強大的分析工具 ，可以實現最準確的細胞群定量和詳細的表征，從而顯著有利于生物醫學研究。