葡萄糖含量測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。

測定原理：

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水

試劑的組成和配制：

試劑一：0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體 10ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體 10ml×1瓶，4℃保存；

葡萄糖提取：

1、組織的處理：按照組織質量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴10分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液備用。

2、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL蒸餾水），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復30次），95℃水浴10分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液備用。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至505nm，蒸餾水調零。

2、混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合，用多少配多少。

3、加樣表（在EP管或96孔板中加入下列試劑）：

混勻，置37℃（哺乳動物）或25'C（其它物種）保溫15min后，于505nm波長處讀取吸光度。空白管、標準管和測定管吸光值分別記為A1、A2和A3。空白管和標準管只要做一管。

葡萄糖含量計算：

1、按樣本蛋白濃度計算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷Cpr。

2、按樣本鮮重計算

葡萄糖含量（µmol/g 鮮重）= (C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷W

3、按細菌或細胞密度計算

葡萄糖含量（µmol/ 104 cell)= (C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷

(A2-A1)

C標準：標準管濃度，0.5µmol/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500萬。注意：*低檢測限為50nmol/g鮮重或0.5nmol/mg prot

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